A-level 生物学/生物学基础/蛋白质结构与功能
遗传分子必须能够携带制造新细胞的指令,并具有被复制的能力,每次复制时都完全相同,并且可以复制很多很多次。
DNA(脱氧核糖核酸)和 RNA(核糖核酸)都是大分子。它们也是多核苷酸 - 由许多类似的称为核苷酸的分子组成的聚合物。DNA 和 RNA 都可以简单地称为核酸。核苷酸通过缩合反应连接在一起。
核苷酸是有机化合物,由三个连接的结构组成:一个含氮碱基、一个戊糖和一个磷酸基。DNA 仅包含四种核苷酸 - 腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶。RNA 包含相同的四种,除了胸腺嘧啶被尿嘧啶取代。连接的糖是核糖或脱氧核糖,唯一的区别是脱氧核糖在其分子中少了一个氧原子。碱基有两种类型 - 嘌呤和嘧啶 - 你只需要知道腺嘌呤和鸟嘌呤是嘌呤碱基,以及嘌呤碱基更大即可。
为了形成 DNA 和 RNA,这些核苷酸中的许多以多核苷酸链的形式连接在一起。这种多核苷酸链的结构见下图:[1]。如你所见,它由交替的糖和磷酸盐形成,含氮碱基向侧面突出。DNA 分子只是两个这样的链并排排列,以相反的方向运行,由氢键连接在一起。
在 DNA 分子中,两个嘌呤链之间的空间不足以彼此相对,因此两条链中只有一条可以是嘌呤碱基。然而,这不是问题,因为碱基是配对的 - **互补碱基配对** - 腺嘌呤总是与胸腺嘧啶配对,胞嘧啶总是与鸟嘌呤配对(A-T,C-G,在 RNA 中,是 A-U,因为胸腺嘧啶不出现)。DNA 分子形成 3D 螺旋形状,由氢键连接,而 RNA 保持单链多核苷酸形式。
右边的图相当复杂,但你只需要注意到碱基之间的氢键、糖磷酸骨架和互补碱基配对 - 对于 A-Level,不需要特定的结构。
为了使 DNA 可行,它必须能够被完美地复制很多次 - DNA 发现者沃森和克里克建议,DNA 的两条多核苷酸链可以分开,新的核苷酸(正确的、互补的核苷酸)可以沿着每条链排列,形成新的 DNA 分子。然后,DNA 分子可以重新缠绕成双螺旋。这个过程被称为半保留复制,因为原分子的一半在每个新分子中都得到了保留。
氮是 DNA 的主要成分,有两种不同的同位素 - 14N 和 15N。14N 是迄今为止最丰富的氮同位素,但含有较重 15N 同位素的 DNA 也能起作用。
由梅塞尔森和斯坦在 1958 年进行的实验如下;
大肠杆菌,一种无害的细菌,生活在人体消化道中,在含有 15N 的培养基中生长了几代。由此产生的细胞的 DNA 密度更高(它们更重)。之后,将仅在 DNA 中含有 15N 的大肠杆菌细胞放回 14N 培养基中,并允许一些细胞仅分裂一次,一些分裂两次、三次或更多次。然后从每组细胞中提取 DNA,并将其放入氯化铯溶液中,然后在离心机中旋转。DNA 越重,它最终停留的位置就越接近试管底部。仅在 15N 中生长的 DNA 停留在最靠近底部的位置,而那些在 14N 中分裂一次的组的 DNA 停留在纯 14N 和纯 15N 之间 - 一个中间组,表明该 DNA 的氮有一半是 14N,一半是 15N。
本节讨论 DNA、RNA 和蛋白质的合成方式。
所有细胞活动都是化学反应,所有化学反应都由酶控制 - 那么什么控制酶呢?DNA。DNA 为蛋白质编码,控制制造哪些蛋白质以及制造多少蛋白质。蛋白质由氨基酸链组成,蛋白质的结构和功能取决于这些氨基酸的确切序列 - DNA 通过决定氨基酸连接在一起的确切顺序来控制这种蛋白质结构。
氨基酸序列由 DNA 分子中核苷酸序列编码 - 三个碱基形成一个三联密码。每个三联密码编码一个氨基酸(例如,T-T-T,胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶代表氨基酸赖氨酸),并且总是以相同的方向读取。
基因是 DNA 分子的一部分,它仅编码一个多肽,仅在人类中,估计有 140,000 个基因。基因组是单个细胞中的全部信息,即该生物体的基因组。
转移 RNA(tRNA,下图)是细胞质中的游离分子 - 在图中标记为 'a' 的位置是反密码子,三个未配对的碱基,因此每个 tRNA 都会与特定的氨基酸结合。这些氨基酸也存在于细胞质中,并在酶的控制下在图中 β 点处结合。
过程
- 1. 在细胞核内,DNA 双螺旋解开以暴露一个含氮碱基序列。
- 2. 转录 - 将该链的副本制成信使核糖核酸(mRNA),在转录后,该链通过核膜中的一个孔从细胞核中移出,进入细胞的主体,在那里发生蛋白质合成。
- 3. mRNA 与核糖体的小亚基结合。转移 RNA(tRNA)将游离氨基酸带到核糖体。
- 4. tRNA 上的反密码子识别 mRNA 链上的密码子(从细胞核中的 DNA 链复制而来),核糖体将氨基酸添加到正在生长的多肽链中,将其从 tRNA 中切断。这个过程被称为翻译。
- 5. 随着多肽链的生长,它会折叠形成蛋白质。
参见图片:[2]
自1950年我们首次确定蛋白质合成和半保留复制以来,我们已经发展到可以改变和插入细胞DNA的水平。工业生产胰岛素就是一个很好的例子。
糖尿病最常见的原因是患者的胰腺无法产生胰岛素,I型糖尿病患者(胰岛素依赖型糖尿病)需要定期注射胰岛素才能生存。这种胰岛素以前来自动物的胰腺,例如牛或猪 - 这种方法昂贵,风险更大,因为胰岛素不是人胰岛素,而且人们有伦理上的反对。因此必须做些什么 - 科学来拯救。胰岛素基因被提取出来,插入细菌载体中,复制并提取,详情如下。
为了使用胰岛素基因(一个相对较小的基因),它首先必须被分离 - 而且无法直接进行,所以提取了携带胰岛素编码的mRNA。然后将这种mRNA链与一种叫做逆转录酶的酶一起孵育 - 一种逆转转录的酶,从RNA制造DNA,制造两条链,创造一个编码胰岛素的DNA双螺旋基因。为了使这些胰岛素基因能够粘附到其他DNA上,它们被赋予了粘性末端 - 在多核苷酸链的每一端有一小段鸟嘌呤。
为了让大肠杆菌复制胰岛素基因,因为它来自人类,必须使用载体,在这种情况下,载体被称为质粒。质粒是存在于原核细胞中的环状DNA,可以将人类DNA添加到其中。质粒通过用酶溶解其细胞壁,然后离心分离从细菌中提取 - 将较小的质粒留在顶部。这些质粒被提取出来,用限制性内切酶切割并添加粘性末端 - 这次是胞嘧啶末端,以便可以使用一种叫做DNA连接酶的酶将DNA链的鸟嘌呤末端连接起来。产物被称为重组DNA。
然后将质粒与大肠杆菌混合 - 并非所有细菌都能摄取质粒,而那些没有摄取质粒的细菌会被抗生素杀死。那些摄取质粒的细菌也获得了抗生素抗性,因此只有那些带有质粒的细菌才能存活下来。这些基因修饰的细菌被大规模培养,分泌胰岛素,胰岛素被提取和纯化,然后可以被糖尿病患者使用。
基因工程还有许多其他用途 - 我们已经学会将基因插入任何生物体,我们甚至在基因治疗领域取得了成功 - 用好的基因替换有缺陷的基因,这可以用来治疗遗传性疾病。
然而,患有血友病的人们从一种叫做人凝血因子VIII的蛋白质中获得了巨大的帮助,这种蛋白质由几家公司通过基因修饰的仓鼠细胞生产。血友病是一种血液无法凝固的疾病,这种蛋白质使血液凝固 - 这些患者确实需要定期注射人凝血因子VIII。它被认为比来自捐献血液的重组DNA更好,因为后者存在感染风险。