高效液相色谱中的化学发光/分析化学发光检测
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图 D10.1 - 高效液相色谱与化学发光检测流程图。
高效液相色谱包括将液体样品注入流动相，流动相通过填充固体或支持液体固定相的色谱柱。分离是由于固定相和流动相之间以及样品中分离组分的分配、吸附、尺寸排阻或离子交换导致的，分离后的组分通常由紫外吸收检测器检测。图 D10.1 展示了典型仪器使用的流程图。
与化学发光检测相结合，将这种技术的高灵敏度与强大的分离方法的选择性结合在一起。它需要测量色谱柱洗脱液中分析物与化学发光试剂之间柱后反应产生的发射光，化学发光试剂由额外的泵输送，并结合快速混合装置。在最大化学发光强度处进行测量需要优化混合点和检测器之间的传输时间（取决于管路的长度和流速）。在设计耦合仪器时，最重要的是确保高效色谱分离所需的条件与强化学发光所需的条件之间的兼容性。分离很大程度上取决于流动相的组成，而化学发光发射已知受溶剂、pH、反应温度以及增强剂和/或催化剂的存在的影响。[1]
图 D10.2 - 分析物衍生化后测量化学发光的柱后仪器（PMT = 光电倍增管；REC = 记录仪）。
色谱柱与化学发光之间的接口可能非常复杂。例如，过氧化草酸酯化学发光经常与 HPLC 耦合。由于它只检测荧光分析物（见 B5 章），因此成功的检测取决于在添加化学发光试剂之前对从色谱柱洗脱的分析物进行衍生化。图 D10.2 显示了用于用过氧化草酸酯化学发光测定儿茶酚胺的部分柱后装置，该装置在与乙二胺反应后，产生了荧光衍生物。[2] 为了简单起见，系统不同部分的不同温度的装置没有显示。