分子克隆/DNA提取
从组织培养瓶中以单层培养的细胞或从处死动物的组织样本（例如肝脏）中大规模分离基因组 DNA。简而言之，在聚丙烯管中，向 10 毫升提取缓冲液（10 毫摩尔 Tris.Cl pH 8.0、0.1 毫摩尔 EDTA pH 8.0、20 微克/毫升胰蛋白酶 RNase、0.5% SDS）中加入 2.5 × 107 个 PCC4 细胞（用胰蛋白酶处理并悬浮在 TE pH 8.0 中）或 100 毫克组织（在液氮中冷冻并通过粉碎粉碎）。通过反转将内容物完全混合，并在 37 摄氏度下孵育 1 小时。向裂解的细胞中加入 1 毫克蛋白酶 K，最终浓度为 100 微克/毫升（来自 20 毫克/毫升的储备液），通过反转轻轻混合，并在 37 摄氏度下孵育 3-5 小时或过夜，并在孵育过程中频繁混合。蛋白酶 K 消化后，观察到无碎片的粘性溶液。将溶液冷却，加入等体积的三斯饱和酚，在旋转扭矩上混合以混合两相，然后在室温下以 10,000g 离心 5 分钟。使用带有切断尖端的 5 毫升移液管转移上层无色的水相粘性相。水相进一步进行两轮酚-氯仿提取和一轮氯仿提取。然后将水相转移到干净的聚丙烯管中，加入 0.1 体积的 3 毫摩尔醋酸钠（pH 4.2）和 2 体积的无水乙醇，在室温下混合内容物。使用 1 毫升移液管尖端将基因组 DNA 沉淀物缠绕起来，并转移到含有 70% 乙醇的 1.5 毫升 Eppendorf 管中，短暂离心。所得沉淀物用另外两轮 70% 乙醇进一步洗涤，短暂风干，加入 1 毫升新鲜的高压灭菌水，并将样品在 4 摄氏度下过夜，使基因组 DNA 溶解。在 0.7% 的琼脂糖凝胶上检查 DNA，总产量确定为 PCC4 细胞和组织的每种 100 微克。
提取缓冲液
10 毫摩尔 Tris.Cl pH 8.0,
0.1 毫摩尔 EDTA pH 8.0,
20 微克/毫升胰蛋白酶 RNase,
0.5% SDS