蛋白质组学/蛋白质分离 - 电泳/等电聚焦
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在等电聚焦中，蛋白质根据其等电点 (pI) 在 pH 梯度中通过电泳分离。在凝胶中产生 pH 梯度，并在凝胶上施加电势。在除等电点以外的所有 pH 值下，蛋白质将带电。如果它们带正电，它们将向凝胶的负极移动，如果它们带负电，它们将向凝胶的正极移动。在等电点，由于蛋白质分子不带净电荷，因此它们会积累或聚焦成一个清晰的条带。
固定 pH 梯度用于 IEF，因为固定的 pH 梯度在非常高的电压下在长时间运行中保持稳定。IPG 的 pH 梯度是通过将缓冲化合物共价结合到聚丙烯酰胺凝胶中而产生的。IPG 是带有塑料背衬片的铸造条，并在不同的 pH 范围内和长度上商购获得。它们提供高分辨率、高重现性和允许高蛋白质负载。等电聚焦在用于提取或溶解蛋白质的相同溶液中进行。带有蛋白质样品的 IPG 条必须在再水化/样品缓冲液中再水化，在此期间蛋白质样品被加载到条中。再水化可以是主动的或被动的。为了加载更大的蛋白质，在小电压下应用主动再水化。当样品进行电泳时，蛋白质将根据电荷向阳极或阴极移动。当蛋白质到达其各自的 pI 时，它们会停止移动。在 IEF 电池中运行后，蛋白质会根据其等电点在条带上聚焦成条带。聚焦的条带可以冷冻保存。