学校科学/琼脂平板
琼脂平板是一个含有琼脂和营养物质的无菌培养皿，用于培养细菌或真菌。通常，平板中还会添加“选择”物质，例如抗生素。
大多数类型的琼脂都是以粉末形式预先制备购买的，虽然可以购买基础琼脂混合物并单独添加营养物质。对于典型的标准混合物，例如 LB 琼脂，在自动搅拌器上，每升蒸馏水中加入以下物质：
- 10克氨基酸（通常是胰蛋白胨或蛋白胨）
- 5克酵母提取物
- 5克 NaCl
- 15克琼脂（省略此步骤会产生液体 LB）
轻轻煮沸混合物有助于溶解：可以在微波炉中或在温和的火焰上进行。溶解后，琼脂需要进行灭菌，通常是将其倒入锥形（锥形）烧瓶中，然后用棉花塞密封顶部，最后用一层松散的铝箔覆盖棉花塞。然后在高压灭菌器中灭菌 15 分钟。然后让无菌琼脂冷却至 50 °C：这略高于琼脂的凝固点，在这个较低温度下倒入有助于防止盖子上形成冷凝水。在这个步骤中添加化学试剂（例如抗生素）以防止它们在较高温度下降解；琼脂特别有用，因为它可以在较高温度下进行灭菌，但由于它在较低温度下凝固，因此可以添加化学添加剂而无需担心降解。在倒入平板之前，要格外小心，不要让杂菌污染它们：必须使用无菌技术。
- 用抗菌肥皂和热水彻底清洗双手。
- 用乙醇或其他消毒剂擦拭工作台。
- 设置一个本生灯，使其产生柔和的蓝色火焰。这将用于灭菌烧瓶口，并提供一个相当无菌的环境。这也将用于火焰烧灼在倒入过程中产生气泡的平板。
- 将要倒入的平板放在工作台上，盖子仍盖着。
- 取下铝箔并丢弃。用小指取下棉花塞。整个过程都要用小指握住它，不要放下来。
- 火焰烧灼烧瓶口以杀死瓶口外缘的细菌。
- 轻轻抬起平板盖子，以允许将琼脂倒入，然后快速将平板中倒入一半的琼脂。
- 盖上盖子，轻轻旋转平板以确保熔融琼脂均匀分布，然后让平板在工作台上静置至少 20 分钟，使其凝固。
- 倒完所有平板后，火焰烧灼烧瓶口，重新插入棉花塞。任何未使用的琼脂仍然是无菌的。
为了可追溯性，将分配给烧瓶的批号写在用其倒入的平板上。
在接种之前，在平板底部靠近边缘的地方写下重要信息：
- 接种日期
- 培养温度
- 培养持续时间
- 接种的微生物
- 平板者的姓名缩写
接种琼脂平板最常用的方法是划线法。
划线平板
- 使用这种方法，将少量样品放在琼脂平板的侧面（可以使用拭子，或者如果样品是液体，可以使用接种环从接种环中滴入）。
- 然后使用无菌接种环（火焰烧灼至红热，然后接触琼脂冷却，不要接触接种的样品），从初始接种部位沿一个方向将细菌扩散出去。这是通过使接种环来回移动完成的，穿过初始接种部位。
- 然后再次灭菌接种环（通过火焰烧灼），然后将第一次划线扩散出去。
- 重复此操作 2-3 次，绕着琼脂平板移动。
应该发生的是，单个细菌细胞被划线分离，当平板被培养时，会形成离散的菌落，这些菌落将从单个细菌开始。
这种模式用于培养尿液。将一个小接种环浸入尿液中，然后在琼脂平板中间划线。然后将接种环在直角方向上多次进出第一个划线，来回摆动。
将一根针火焰烧灼后浸入培养物中。然后将其刺入一个小无菌的营养琼脂瓶中。如果细菌是厌氧的，它们就会生长，否则它们就不会生长。
菌苔通常用于测试对抗生素的敏感性或进行噬菌体研究。需要的是在整个琼脂平板上均匀而完全地蔓延生长（“菌苔”）。在抗生素圆盘周围将会有一个细菌生长受到抑制的透明区域；可以测量该区域的直径以确定该菌株是否对该抗生素具有抗性。
制备菌苔的一种方法是使用 0.5 麦氏浊度细菌生理盐水悬液（这意味着生理盐水略微浑浊）。将无菌拭子浸入该悬液中，然后将其在整个琼脂平板上从一侧移动到另一侧，使所有区域都被覆盖。将平板旋转 90°，然后将拭子在垂直于第一次移动的方向上从一侧移动到另一侧。用旋转 45° 的拭子重复此操作一次。
制备菌苔后，将一块无菌滤纸圆片浸泡在抗生素中，然后放在平板上。培养后，如果菌苔细菌对该抗生素敏感，在滤纸周围将出现一个无生长环。可以从商业上购买每个浸泡在不同抗生素中的小圆片，并连接到一个更大的环上。它们被称为抗生素敏感性圆片或“Mastrings”（Mast Group Ltd 的商标），可以用来一次性测试生物体对一系列抗生素的敏感性。
平板倒置培养，以防止冷凝水滴落到接种表面上。
一些平板在 37°C 的 5% CO2 气氛中培养：这是人体某些细菌生长的温度和条件。特殊的培养箱可以维持这些条件。
一些细菌必须在厌氧条件下（没有氧气）培养。这些细菌可以放在容器中，以及一种去除氧气的物质一起，并将密封的容器放在常规培养箱中。
真菌和一些细菌（例如 *耶尔森氏菌*）应该在略低的温度下培养。通常为 30°C，通常使用室温空气。
酸奶细菌在更高的温度下生长（通常约 45°C）。因此，它们在微生物学教学中使用非常安全，尤其适合儿童。
*弯曲杆菌* 是一种难以生长的细菌物种。它需要特殊的琼脂平板和它自己的 *微需氧* 环境。
- 血琼脂 - 含有动物血液细胞（例如绵羊）。大多数细菌可以在这种培养基上生长。
- 巧克力琼脂 - 含有溶血红细胞，用于培养苛求的（挑剔的）呼吸道细菌。
- 新霉素琼脂 - 含有新霉素抗生素。
- 沙氏琼脂 - 用于培养真菌。它含有庆大霉素，并且具有较低的 pH 值，可以杀死大多数细菌。
- 泰氏-马丁琼脂 - 用于分离 *淋病奈瑟菌* 的巧克力琼脂。
- XLD 琼脂 - 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂。它用于粪便样本的培养，并包含两种指示剂。它的配方是为了抑制革兰氏阳性细菌，同时促进革兰氏阴性杆菌的生长。乳糖发酵菌的菌落呈黄色。
- 营养琼脂 - 在学校科学实验室中使用安全，因为它不会选择性地培养病原菌。
- 干草浸液琼脂 - 用于培养粘菌。
- 麦康凯琼脂 - 麦康凯琼脂既是选择性培养基又是鉴别培养基。该培养基用于区分革兰氏阴性细菌，同时抑制革兰氏阳性细菌的生长。在琼脂中添加胆盐和结晶紫会抑制大多数革兰氏阳性细菌的生长，从而使麦康凯琼脂具有选择性。该培养基还区分乳糖发酵菌和非乳糖发酵菌。添加乳糖和中性红可以区分乳糖发酵菌（形成粉红色菌落）和非乳糖发酵菌（形成透明菌落）。
- 精神蓝琼脂 - 含有脂质的培养基，可以测试脂酶的存在。如果细菌能够在这些脂质存在的情况下产生脂酶，精神蓝染料将与脂质一起被消化，脂质与染料一起作为乳化液混合。这种培养基通常呈不透明的浅蓝色，在产生脂酶的细菌菌落周围会出现晕圈。
- 胰蛋白胨大豆琼脂 - 通常用于 **细菌 - 金黄色葡萄球菌**。
使用完的平板 **必须** 在扔掉之前进行安全处理。通常的方法是将其放入高压灭菌袋中，然后在 121°C、103 kPa (15 psi) 下进行高压灭菌 15 分钟。塑料平板会融化（因此需要使用袋子）。大约 20 分钟后，高压灭菌器会冷却下来，可以安全地扔掉袋子。如果无法使用高压灭菌器，可以使用普通的家用高压锅，或者在医院或专业实验室可以使用焚化炉。
其他设备可以通过放置在合适的消毒剂（如 Virkon）中 24 小时来消毒。
所有操作完成后，再次对工作台进行消毒。最后一步是用抗菌肥皂和热水彻底洗手，然后离开实验室。