蛋白质组学/蛋白质分离- 电泳/毛细管电泳
在毛细管电泳(CE)中,电泳是在充满缓冲液的小管中进行的,这些小管被称为细管毛细管。电泳仪器中使用的毛细管通常具有 25 到 100 μm 的内径。
毛细管的两端放置在单独的缓冲液中,连接到高压电源的电极放置在缓冲液中。其中一个缓冲液容器,通常在阳极处,被样品取代。样品通过毛细管作用、虹吸作用或压力引入毛细管。当电流通过毛细管时,分子被分离。分离的分析物通过毛细管壁被连接到另一端的紫外或荧光检测器直接检测。[1]
在其他分离技术(如高效液相色谱)中,分离是由压力驱动的。这会导致流动相与固体表面接触处的摩擦力。这些摩擦力导致靠近壁的流动相速度为零,而中心的力很大,导致毛细管中出现抛物线流动剖面。这种剖面导致溶质区在通过毛细管时变宽,从而降低分离的分辨率。在 CE 中,流动是平坦的,这导致比比较的压力驱动技术更高的分辨率。
CE 的数据输出是电泳图,它是迁移时间与检测器响应的曲线图。检测器响应通常是浓度相关的荧光或紫外-可见吸收。电泳图中显示了分离分析物的不同峰,取决于不同的保留时间。电泳图显示了混合物中阳离子、阴离子和中性溶质的分离峰。
CE 在许多方面都具有优势。平板凝胶上的高电压负载产生的热量会对蛋白质的分离产生负面影响,使用毛细管可以减少这种热量积累。此外,由于不需要处理凝胶,可以让人使用液体聚合物进行分离,并且可以在运行之间更换。自动化也更容易在该技术中实现,从而减少了所需时间,并产生了可重复的结果。
毛细管电泳的维基百科页面可以在此处找到。
电泳图的维基百科详细信息可以在此处找到。
^ “毛细管电泳:一种简单技术。” http://www.beckmancoulter.com/resourcecenter/labresources/ce/cedefinitionmodes.asp