蛋白质组学/蛋白质分离- 电泳/QPNC-PAGE
定量制备性天然连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 (QPNC-PAGE) 是一种电泳技术，用于分离生物样本中的天然或活性金属蛋白，并解决复杂蛋白混合物中正确和错误折叠的金属辅因子蛋白。一些金属蛋白的例子包括金属伴侣蛋白、朊病毒、金属转运蛋白、淀粉样蛋白、金属酶和金属肽。
凝胶在室温下聚合 69 小时。这导致形成机械稳定的、均匀的、无单体或自由基的凝胶，因此凝胶与生物分子之间的相互作用可忽略不计。金属蛋白在电泳过程中不会解离成金属辅因子和脱辅基蛋白，并且纯化的金属蛋白以定量的方式分离在不同的 PAGE 组分中。由于凝胶的特殊特性，分离后的蛋白质的构象或活性结构不会受到这种方法的影响。
可以使用尺寸排阻色谱法研究和确认特定金属蛋白的化学稳定性。
用于电泳的缓冲液包含 20 mM Tris-HCl、1 mM NaN3，pH 值为 10。由于凝胶和缓冲液溶液的特殊特性，样品中的大多数蛋白质带负电荷，在电场中从阴极迁移到阳极。蛋白质通过生理缓冲液溶液连续洗脱，并分离在不同的组分中。[1]
可以通过质谱法鉴定和量化在不同 PAGE 组分中洗脱的金属辅因子。由于纯金属蛋白在非变性条件下分离，因此可以通过溶液 NMR 光谱法获得这些蛋白质的结构。
金属蛋白的错误折叠会导致阿尔茨海默病等退行性疾病。生物流体中金属伴侣蛋白的定量分析有助于对这些蛋白质错误折叠疾病中具有生物活性的金属辅因子蛋白的结构-功能关系进行临床研究。[2] QPNC-PAGE 与生物质量和 NMR 光谱法相结合，提供了有关生物系统中重要金属辅因子代谢的宝贵信息。
可以在 此处 找到 QPNC-PAGE 的维基百科条目。
维基百科还有一篇关于 NMR 光谱法的文章，可以在 此处 找到。
- ^ Kastenholz, Bernd; Garfin, David E. (2010 年 7 月 6 日). "通过 QPNC-PAGE 分离酸性、碱性和中性金属蛋白". 自然先驱. doi:10.1038/npre.2010.4617.1.
- ^ Kastenholz, Bernd (2007). "阿尔茨海默病诊断和治疗的新希望". 蛋白质与肽通讯. 14 (4): 389–393. doi:10.2174/092986607780363970. PMID 17504097.