蛋白质组学/蛋白质分离 - 色谱/二维 (2D) 色谱
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分离高度复杂的混合物可能是一项非常困难的任务。混合物可以根据其分子量、化学成分、功能和结构进行分离 (Res 5)。单一色谱实验可能无法有效地分离我们感兴趣的蛋白质。在二维色谱中，不同的技术本质上是组合在一起以实现更高程度的分离。这可以通过离线技术来完成，其中一次色谱的结果被手动注入到第二次柱色谱中，或者通过在线方法，其中两个色谱柱通过开关直接耦合。 (Ref 6).
二维色谱被认为是二维电泳的补充。虽然二维电泳根据等电点和大小分离蛋白质，但二维色谱可以使用许多不同的特性组合进行分离。二维色谱有多种类型，包括
- 多维蛋白质识别技术 (Mud-PIT)
多维蛋白质识别技术 (MudPIT) 是一种分离技术，它利用两种色谱技术背靠背，并且可以与二氧化硅毛细管耦合 (Res1)。通常，色谱柱 由强阳离子交换剂 (SCX) 和反相 (RP) 材料组成。MudPIT 的优势之一是带展宽最小化，毛细管可以轻松地直接与质谱仪耦合。策略 最初涉及将蛋白质复合物变性为小肽。然后将样品加载到强阳离子交换剂 (SCX) 色谱柱，随后是反相色谱柱。毛细管可以设置为与质谱仪一起简化流程。 来自 MudPIT 的二维图
- 亲和反相
- 尺寸排阻色谱 - 反相
- 尺寸排阻色谱 - 离子交换色谱
- 离子交换色谱 - 反相
二维色谱作为二维电泳的替代方案正变得越来越受欢迎 (Res 2)。它非常适合分离具有更极端 pI 范围或更大分子量范围的蛋白质。二维色谱的一个很好的优势是它可以与质谱仪直接耦合。在电泳中，必须从凝胶中切割样品以进行回收。
下面显示了利用二维色谱的设置示例
- 化学学会网络 MudPIT
- GE Healthcare - 如何组合纯化步骤 || 多维液相色谱
- MudPIT 页面
- 贝克曼库尔特 ProteomeLabTM 蛋白质分离系统
- 聚合物标准服务 二维液相色谱入门
- Kislinger T, Emili A. 多维蛋白质识别技术：现状和未来展望。 专家蛋白质组学评论。 2005 年 1 月；2(1):27-39。*
- Venkatramani CJ, Zelechonok Y. 二维分离：概念和前景 J 色谱法 A。 2005 年 2 月 25 日；1066(1-2):47-53。
- Link AJ, Eng J, 等。 使用质谱法直接分析蛋白质复合物。 Nat Biotechnol。 1999 年 7 月；17(7):676-82。
- Paoletti AC, 等 多维蛋白质识别技术的原理和应用。 专家蛋白质组学评论。 2004 年 10 月；1(3):275-8。*
- Takahashi N, 等 用于分离极其复杂的肽混合物的自动化串联高效液相色谱系统。 J 色谱法。 1985 年 6 月 19 日；326:407-18。
- Venkatramani CJ, 等 具有混合模式固定相的二维液相色谱。 J 色谱法 A。 2005 年 2 月 25 日；1066(1-2):47-53。
- Franktisek Svec 二维高效液相色谱 *
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