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结构生物化学/细菌转化技术

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细菌转化

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细菌转化是一种在分子生物学实验室中常用的基本技术。该技术通过将外源质粒导入细菌中,然后利用细菌来扩增外源DNA。如果外源DNA具有其DNA聚合酶能够识别的复制起点,细菌就可以复制外源DNA。然后,细菌会与其自身的DNA一起复制外源DNA。这种新的DNA链有时可以为生物体提供新的性状,这些性状可以在转化后识别出来。

热激在转化中的作用

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热激是指将细胞暴露于高于其在生物体中通常发现的温度。热激会导致外膜形成孔洞,从而允许DNA进入细胞。然后从细胞中去除热源,膜在DNA进入后重新形成。

电穿孔在转化中的作用

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外源DNA插入真核细胞中的基因

电穿孔在转化中的作用与热激相同,但方法不同。在电穿孔中,对细胞施加电场,导致细胞膜的电导率和通透性显著增加,从而允许外源DNA进入细胞。细菌还含有由肽聚糖构成的细胞壁,这些细胞壁自然多孔,只起到保护细菌的壳的作用。如果将质粒与细菌混合,则在电穿孔后可以将质粒转移到细胞中。电穿孔中的电场是由称为电穿孔仪的设备产生的。

氯化钙在转化中的作用

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添加氯化钙会产生钙离子,有助于细胞膜更容易渗透DNA质粒。这种利用电子破坏细胞膜的方法通常与热激结合使用。其中,温度的剧烈变化会导致膜变得更加多孔,从而使所需的DNA片段更有效地转化到目标细菌中。这种感受态方法与质粒DNA结合使用时比与线性DNA结合使用时更有效,因为细菌中存在某些酶可以很容易地降解线性DNA。

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