结构生物化学/酶/时间依赖性抑制
大多数抑制剂在与酶建立结合平衡时作用非常快。然而，紧密结合抑制剂在更慢的时间尺度上建立其平衡。因此，这些类型的抑制剂被称为时间无关抑制剂，因为它们显示出随时间变化的初始速度变化。有四种类型的相互作用可以减慢抑制剂的动力学。第一个是当酶根本没有抑制剂时。第二个相互作用是当平衡常数与抑制剂可逆时酶的周转率相比非常小时。第三个相互作用是当抑制剂结合时，它形成一个 EI 复合物，然后异构化为形成一个新的复合物。这种新的复合物显着抑制了反应，因此减慢了反应速度。第四个相互作用涉及不可逆抑制剂，它们可以作为酶的亲和标记，因此根据其机制减慢反应速度。时间依赖性抑制剂的两个例子是丝氨酸蛋白酶和前列腺素 G/H 合成酶。
确定可逆性涉及执行大量稀释、透析、过滤结合或尺寸排阻色谱。为了区分共价失活和非共价抑制，重要的是能够判断抑制剂在酶变性时是否被释放。例如，如果有一个共价抑制剂并且它被变性，那么由于抑制剂和酶之间的共价键，抑制剂仍然会与变性蛋白结合。但是，如果抑制剂是非共价的，那么酶的活性位点会将抑制剂释放到变性溶液中。
Copeland, Robert A. Enzymes. Wiley-VCH, Inc., 2000. 318-34.