结构生物化学/酶催化机制/EcoRI

概述

大肠杆菌 (EcoRI) 是一种位于限制修饰系统中的核酸内切酶。EcoRI 也从大肠杆菌菌株中分离出来。EcoRI DNA 负责携带 fi+ 抗药性转移因子 RTFI 的大肠杆菌菌株的特异性。这是由于在识别序列内引入了两个单链交错。由于 EcoRI 酶被认为是最简单的序列特异性 DNA 酶，因此它们非常适合研究蛋白质的 DNA 序列识别。也可以使用这种酶来比较两种蛋白质与相同 DNA 序列的相互作用。

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它从大肠杆菌菌株中提取，是限制修饰系统的一部分。在分子生物学中，它被用作限制性内切酶，它产生带有 5' 末端突出端的粘性末端。酶切割的核酸序列为 GAATTC，互补序列为 CTTAAG。EcoRI 被广泛用于各种分子遗传技术，包括克隆、DNA 筛选和体外删除 DNA 部分。像 EcoRI 这样的产生 DNA 粘性末端的限制性内切酶通常用于在连接之前切割 DNA，因为粘性末端使连接反应更有效。EcoRI 可以表现出非位点特异性切割，称为星形活性，具体取决于反应中存在的条件。使用 EcoRI 导致活性的条件包括低盐浓度、高甘油浓度、反应中存在的酶过量、高 pH 值以及某些有机溶剂的污染。已经开发出一种在大规模生产中高产分离大肠杆菌 RI 核酸内切酶的方法。纯化后的酶是均质的，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和分析沉降所示。

参考文献

1. Modrich, Paul 和 Donna Zabel。EcoRI 核酸内切酶：均质酶的物理和催化特性。美国：生物化学杂志，1976 年 3 月 2 日。PDF。