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结构生物化学/酶催化机制/HindIII

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HindIII 是一种 II 型限制性内切酶,来源于流感嗜血杆菌。HindIII 是位点特异性的,当存在辅助因子 Mg2+ 时,通过水解切割 DNA 序列 AAGCTT。这种序列的切割会导致 5' 粘性末端。

5'-A |A G C T T-3'

3'-T T C G A| A-5'

这种 II 型限制性内切酶由四个 β-折叠和一个 α-螺旋组成。作为 II 型限制性内切酶,HindIII 保护宿主基因组免受外来 DNA 的侵害。

提议的机制和用法

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HindIII 首先通过氢键和较弱的力(如范德华力)与 DNA 骨架结合。当到达特定序列时,有人提出 HindIII 通过 Lys-92 稳定亲核水,同时离去氢氧根阴离子被 Asp90 稳定来水解 DNA。

作为 II 型限制性蛋白,HindIII 的作用在于它在非常特定的位点切割 DNA,不同于 I 型,I 型在特定位点以外的位点随机切割。因此,HindIII 用于基因工程和分子生物学。它可以添加、删除或改变特定基因,这在试图改变生物体的基因组时非常重要。

它是一种从流感嗜血杆菌中分离出来的 II 型位点特异性脱氧核糖核酸酶限制性内切酶,在辅助因子 Mg2+ 的存在下,通过水解切割回文 DNA 序列 AAGCTT。这种序列在 AA 之间的切割会导致 DNA 上称为粘性末端的 5' 突出。

参考文献

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Tang, D 等人。(2000)。“限制性内切酶 HindIII 突变体 E86K 的突变分析,该突变体具有更高的活性并改变了特异性”。蛋白质工程 Horton,N.,Newberry,K. Perona,J. (1999)。“II 型限制性内切酶中金属离子介导的底物辅助催化”。美国国家科学院院刊。

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