结构生物化学/组织学
它是什么?
它是研究动植物组织的学科。组织学家通常使用组织(即专门细胞群)并促进将染色剂应用于这些组织,以便在切片后对其进行研究。通常有两种类型的组织切片制备方法。通常,人们可以冷冻组织,然后将其切片成 30-60 微米,或者使用“石蜡包埋”方法,在这种方法中,将热蜡浇注在目标组织上并模塑成一个块。然后使用切片机对该块进行切片,得到的组织通常更薄。
历史
马切洛·马尔皮基是罗伯特·胡克(发现细胞的科学家)的同代人,他被认为是第一位组织学家。他能够使用 17 世纪的古老显微镜来研究组织的结构和组成部分。然而,另一位名为玛丽·弗朗索瓦·比夏的科学家在马尔皮基之后引入了“组织”一词,并为许多细胞协同工作以实现特定功能奠定了框架。有些人认为比夏是现代动物组织学之父。在现代,组织学家通常只收集四种主要类型的组织,包括结缔组织、上皮组织、肌肉组织和神经组织。直到比夏去世后,“组织学”一词才开始传播。组织学源于两个希腊词,Histo 意为组织,logo 意为研究。然而,有些人认为鲁道夫·冯·柯立克是组织学的真正创始人,主要是因为他在创建实际教科书并强调组织方面的工作,这本书名为“组织学手册”。
组织固定
是科学家阻止酶活性并以其最自然状态保存组织的方法。固定剂(组织固定中使用的化学物质)通常有毒,并且可以对细菌和寄生虫进行一段时间的消毒。然而,如果在固定组织时过度接触某些固定剂,可能会导致蛋白质被掩盖,从而掩盖表位。通常,组织是通过浸泡或灌注固定方法固定的。为了做到这一点,将甲醛溶解在水中使用。也可以使用多聚甲醛。
冷冻
对于保持组织成分和研究部位的完整性是必要的。然而,由于许多组织含有水,必须使用另一种溶剂将水驱除,以免在冷冻时损坏组织。这可以通过使用蔗糖作为溶剂/培养基来实现。就像渗透作用一样,随着组织外蔗糖浓度的增加,水将从组织中涌出以使溶液达到平衡。这个过程被称为冷冻保护。
切片
切片方法因实验室而异,一些实验室使用石蜡技术,而另一些则使用冷冻方法。
冷冻切片法
在制备样品之前,必须将样品放置在蔗糖溶液中大约一两天,以便通过渗透作用将水驱除出去。对目标组织进行解剖后,必须对组织的一部分进行切片,并将其放置在一个容器中。然后将组织冷冻培养基应用于容器,并将样品放置在其中。然后在干冰下进行冷冻,然后再次放置一层组织冷冻培养基,以便覆盖整个容器。让培养基冷冻约半小时后,进行方形切割。然后将冷冻切割放置在安装盘上,并再次涂抹组织冷冻培养基,以便将样品安装到该盘上。完成此操作后,将安装盘安装到切片机或冷冻切片机上,然后就可以开始切片了。将安装盘安装到冷冻切片机上后,将刀片应用于切片。然而,首先必须对样品进行对齐,以便切割以平面方式进行。根据用户想要获得切片的方式,切割可以以各种方式进行。
参考资料
图辛斯基实验室 - UCSD