结构生物化学/微量纯化
磷酸果糖激酶-1 (PFK-1) 是糖酵解中的一种推测性控制酶。癌细胞线粒体功能缺陷，迫使其依赖糖酵解作为主要能量来源。抗坏血酸（俗称维生素C）已被证明能抑制PFK-1和乳酸脱氢酶（LDH）。在肌肉细胞中，当肌肉活跃时，PFK-1和LDH与肌肉中的收缩蛋白形成复合物，保护其免受抑制，从而使糖酵解得以进行（葡萄糖被降解并产生ATP。当肌肉处于休息状态时，据推测不会形成复合物，抗坏血酸会抑制PFK-1和LDH，糖酵解不会发生，葡萄糖被储存在肝脏和肌肉组织中。肝脏和肌肉组织是糖原的主要储存部位。同时，据推测，由于癌细胞主要依靠糖酵解获取能量，因此癌细胞中的PFK-1不会被抗坏血酸抑制。为了验证这一假说，必须能够纯化PFK-1。由于醛缩酶（Ald）会保护酶免受抑制，因此纯化的PFK-1中不能含有醛缩酶，才能正确验证该假说。
兔肌肉被用作PFK-1的来源。需要准备三种测定方法（PFK-1测定、LDH测定和醛缩酶测定）来使用分光光度计测试每一步后的酶活性。这样做是为了跟踪每一步去除的物质和保留的物质。
准备
将兔肌肉在乙二胺四乙酸（EDTA）、二硫苏糖醇（DTT）和氟化钠（NaF）溶液中混合，然后离心并洗涤以去除可溶性蛋白。重复多次以试图去除一些LDH和醛缩酶。
热处理步骤 含有PFK-1的沉淀物在Tris、MgSO4、EDTA、ATP和DTT溶液中重新悬浮，然后浸入热浴中，之后放入冰浴中。这样做是为了使用ATP和镁使其他蛋白质变性，同时使PFK-1溶解并保持安全。悬浮液离心，保存上清液。
离子交换和染料柱
将上清液置于四个不同的柱子上，所有柱子都用40TP8和DTT标准化。四个柱子是：蓝色琼脂糖、棕色琼脂糖、蓝色葡聚糖和DEAE-Sephacel。上清液通过重力滴入柱子，然后收集进行测试。理论上，PFK-1应该此时粘附在柱子上。将40TP8/DTT溶液加入柱子并收集成分。然后加入含有较高浓度TP8的溶液，并收集成分。加入浓度不断升高的TP8的目的是先洗掉对柱子中珠子亲和力较弱的其他蛋白质。还尝试了使用真空过滤系统的方法，但它会将PFK-1和醛缩酶过快地拉过柱子，没有给PFK-1足够的时间粘附在柱子上，使得这种方法适得其反。
凝胶电泳 从柱子上取出的样品通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测试纯度。
DEAE Sephacel柱子似乎在四种柱子中具有最高的PFK-1活性，但通过PAGE测试时，发现存在大量污染。如前所述，不应该存在醛缩酶，因为它会抑制PFK-1，这将使抗坏血酸对PFK-1影响的测试非常难以进行。蓝色琼脂糖虽然产量不如DEAE Sephacel高，但通过PAGE测试发现其非常纯净。棕色琼脂糖显示出产生高PFK-1产量的潜力，但在持续测试后发现，虽然它很擅长去除醛缩酶，但PFK-1的产率太低。
到目前为止，蓝色琼脂糖在四种柱子中表现最好，但在将此方法应用于癌性组织之前，必须进行持续测试/调整。这是因为虽然蓝色琼脂糖可以很好地去除醛缩酶，但产量仍然不够高，无法有效地用于癌性组织。
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2. Russell P, Williams A, Marquez K, Tahir Z, Hossein B, Lam K. 2008. 抗坏血酸对兔肌肉磷酸果糖激酶-1抑制的某些特性. 酶抑制与药物化学杂志；23: 411-417
3. Vassault, A. 1983. 酶分析方法，酶I：氧化还原酶，转移酶 第三卷，Verlag Chemie，巴塞尔，pp. 118–126。