蛋白质组学/蛋白质样品制备/污染物去除
在几乎任何生物学实验中，消除污染都是至关重要的。这在处理蛋白质时尤其重要，因为人类受试者可能会用他们自己的蛋白质污染样品，导致意外结果。透析、脱盐、蛋白质沉淀和超滤都是可以用来防止不需要的分子，确保准确可靠结果的方法。
透析是一种基于尺寸排阻分离样品中蛋白质的常用方案。半透膜以不同的孔径制造，以便可以根据特定实验的需要选择透析袋。蛋白质样品以溶液形式密封在袋中，然后放入大量的缓冲液中，通常是样品体积的 200-500 倍 [3]。由于样品和缓冲液之间的梯度，样品中的分子试图从透析袋流出，只有那些小于孔径的分子才能实际离开样品 [2]。透析的强大之处在于它能够一次净化样品中的多种污染物，包括小蛋白质和小污染分子，如盐。
基于透析的成功分离的关键是选择最佳的孔径。膜孔径通常以道尔顿为单位测量，因此 1,000 道尔顿的孔将保留分子量为 1,000 道尔顿的分子。有关根据分离制备透析管的更多信息，请在此处查看。
脱盐是另一种从蛋白质样品中去除外来分子的方法，它使我们能够去除去污剂、DNA 或 RNA、脂类和盐。通常，这种方法被称为凝胶过滤或分子排阻。脱盐背后的原理是样品中的分子通过多孔树脂。较小的分子进入孔并被卡住，而较大的分子不适合进入孔，只是简单地流过并流出树脂。通过这样做，较大的分子与溶液中的其他分子分离，这些分子仍然卡在孔中。
与前面讨论的其他方法类似，沉淀涉及在分析之前从蛋白质样品中去除不需要的物质。在这种情况下，是蛋白质被沉淀，从而可以将剩余的溶液倒出。大多数情况下，沉淀是使用盐来实现的。
在低盐浓度下，蛋白质通常比在高盐浓度下更易溶解。利用这一信息，一种被称为盐析的技术通常被使用，它涉及增加盐浓度，直到蛋白质沉淀出来。虽然这是最常见的蛋白质沉淀形式，但可以通过改变溶液的 pH 值或通过引入金属离子来获得类似的结果。
超滤是一个类似于凝胶过滤或分子排阻的过程，但也依赖于压力来分离分子。由于样品压力大，可以使用更小的孔径（约 250 纳米）[4]。然后，较小的分子被强迫通过孔，而较大的蛋白质被保留。