蛋白质组学/蛋白质分离 - 色谱法/色谱理论

蛋白质分离 - 色谱法	蛋白质分离 - 色谱法	固定相和流动相
	色谱理论

章节作者：Laura Grell 和 Alexander Butarbutar
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章节修改者：Kai Burnett 和 Dalia Ghoneim
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色谱理论

色谱法是一种分离分子的方法。该方法利用流动相和固定相之间的差异来分离混合物中的不同成分。目标分子可以根据电荷、大小和疏水性等特性与固定相相互作用。

色谱有两种理论

阿奇博尔德·约翰·波特·马丁和理查德·劳伦斯·米林顿·辛格创造了色谱的塔板理论。塔板理论描述了固定相和流动相处于平衡状态。这两个板之间的分配系数 *k* 可以定义为

K={\frac {Concentration\ of\ solute\ in\ stationary\ phase}{Concentration\ of\ solute\ in\ mobile\ phase}}

随着 *k* 的增加，溶质分离所需的时间也会增加。如果色谱是在固定长度和流速的柱中进行的，则保留时间 $(t_{R})$ 和保留体积 $(V_{r})$ 可以测量并用于确定 *K* 的值。

速率理论由范德姆特提出，用于解释塔板理论无法解释的色谱行为。速率理论基于三个因素：路径相关扩散（A）、纵向扩散（B）和传质（C）。

A. 路径相关扩散发生在色谱柱填充不均匀的情况下，因此两个相同的分析物可能迁移不同，因为其中一个比另一个走得更远。

B. 纵向扩散是物质从高浓度区域（色谱柱上谱带的中心）向低浓度区域（同一谱带的外边缘）移动的结果。纵向扩散随着温度升高而增加。

C. 传质效应是由物质在固定相和流动相之间达到平衡需要时间这一事实造成的。在平衡时间内，流动相仍在移动。这会导致谱带变宽。