蛋白质组学/蛋白质分离 - 色谱法/固定相和流动相

色谱法理论	蛋白质分离 - 色谱法	离子交换
	固定相和流动相

章节作者：Laura Grell 和 Alexander Butarbutar
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章节修改人：Kai Burnett 和 Dalia Ghoneim
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简介

色谱分离包括固定相和流动相。在蛋白质混合物中，目标分子与固定相相互作用，而混合物中的其他蛋白质保留在流动相中。顾名思义，流动相移动并从系统中流出。目标蛋白已成功分离。下一步是从固定相中去除目标蛋白并将其转移到流动相中。这可以通过洗脱目标分子来实现。

流动相可以是液体或气体。气相色谱法在分析化学中得到广泛应用。它在蛋白质组学中的应用较少，因为该技术需要高温，而高温通常不适合蛋白质组学中涉及的大聚合物。气相色谱法依赖于固体固定相和气体流动相之间的分配平衡。气相色谱法几乎总是使用管子进行。固定相通常由填充在附着在毛细管上的柱子中的固体珠组成。

在蛋白质组学中，更有用的流动相是处于液态的流动相。本章中讨论的所有技术都涉及液相色谱法。在这种技术中，传统上存在固体固定相和液体流动相之间的分配平衡。液相色谱法在柱中或平面上进行。

固定相几乎总是固体，但是，有一些色谱实验的例子表明固定相处于其他状态。例如，在逆流色谱法 (CCC) 中，流动相和固定相都是液体。

固定相的形状通常有两种形式

这种色谱法涉及平面固定相。平面可以由一层纸或由玻璃板支撑的凝胶等物质组成。流动相扩散并被允许与平面相互作用。

在纸色谱法中，目标分子被放置在色谱纸上。流动相是一种溶剂。溶剂向上移动纸张。当它到达样品时，溶剂会将其带走。样品的不同组分以不同的速率移动，从而将样品分离成条带。在薄层色谱法中，使用凝胶或二氧化硅基质代替纸张。这往往比纸色谱法提供更快的运行速度和更好的分辨率。

柱色谱法可能是蛋白质组学中最常用的色谱法。固定相在柱中。柱通常由紧密堆积的珠基质组成。流动相进入柱并以恒定速度流出。该柱通常与检测装置（例如质谱仪）耦合。当样品从柱中流出时，可以测量其吸收。这样，任何在流动相中洗脱的蛋白质都可以被检测到。