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酵母人工染色体 (YAC)

与细菌人工染色体 (BAC) 类似，酵母染色体可以在 DNA 克隆过程中用作宿主染色体。与 BAC 类似，YAC（酵母人工染色体）是合成染色体，其中整合了来自外源的 DNA 片段。YAC 与 BAC 之间的区别在于 YAC 不使用质粒，例如 E.Coli 中的 F 因子。相反，YAC 使用酵母染色体的特定区域。酵母染色体包含所有必要的复制部分，包括：着丝粒、端粒末端、DNA 位点标记、限制性内切酶 EcoRI 和 BamHI 以及复制起点。使用上述成分，可以将外源 DNA 片段拼接在端粒和着丝粒之间的任何区域。DNA 片段通过使用限制性内切酶 EcoRI 拼接。切割的 DNA 片段的范围可以从 100 到 1000kb，因此 YAC 允许插入更大的 DNA 序列，这可以提高效率。在切割 DNA 片段后，酵母人工染色体也被两种限制性内切酶消化；EcoRI 和 BamHI。然后在 EcoRI 位点重新组合这些片段，并通过 DNA 连接酶连接在一起，从而形成一个包含插入的 DNA 片段的新染色体。一旦外源 DNA 片段被拼接进入酵母染色体，DNA 复制就会开始，因为 DNA 聚合酶在细胞分裂/有丝分裂期间的复制起点部位开始延长 DNA 链。当宿主染色体延长时，外源 DNA 片段也随之延长。这种方法的结果类似于使用 BAC，即大量的酵母细胞带有片段化的 DNA。然后，酵母染色体中克隆的 DNA 片段可用于基因研究，例如基因作图，或者简单地放入基因库以供进一步使用。