结构生物化学/DNA重组技术/检测特定基因
基因组文库是生物体所有基因的集合。创建基因组文库后，通常需要从新创建的基因组文库中筛选特定的基因。一种方法是进行菌落杂交实验。
此技术用于筛选基于质粒的基因组文库。筛选噬菌体噬斑。首先，通过使用噬菌体感染菌落来转化细菌。将它们接种在培养皿中并孵育，以使噬菌体噬斑形成。在噬菌体所在的位置以及被细菌感染的位置，培养皿上都会出现具有相同噬菌体的噬斑。接下来，通过将硝酸纤维素膜放置在原始培养皿的顶部来复制原始培养皿。这使得噬斑能够以一定的排列方式转移。感染的细菌和噬菌体DNA都会从裂解的细胞中释放出来，并附着在硝酸纤维素膜上形成斑点。然后用 2M NaOH 处理，使噬菌体裂解并分离 DNA 链。当 DNA 被 2M NaOH 处理而变性时，DNA 链更容易与 32P 探针杂交。接下来，必须中和培养皿，然后让其干燥以固定 DNA。然后将其与 32P 探针混合，并使其与硝酸纤维素膜上存在的任何 DNA 序列退火。然后将其置于 X 射线片上进行放射自显影。斑点显示出探针与 DNA 杂交的位置，并用它从原始培养皿上的噬斑中定位基因组克隆。