结构生物化学/DNA 重组技术/基因组文库
外观
基因组文库是指特定生物体的基因目录。它们通常被称为基因库。为了创建基因组文库,生物体的完整基因组被切割成片段并插入克隆载体中。它也可以指载体分子集合。
首先,使用多种限制性内切酶在特定碱基对处进行切割,以创建所需的DNA片段。这些限制性内切酶的选择方式应确保粘性末端与克隆载体兼容,并且这些片段代表了完整的基因组。这也意味着克隆载体用相同的限制性内切酶进行切割,原始片段使用连接酶与克隆载体结合。然后将此混合物插入细菌细胞中以产生文库。每个细胞将具有不同的DNA分子。通过识别重叠序列来存档单个克隆的排序。此目录的重叠序列集被称为重叠群。
有了特定生物体的完整信息库,研究人员就可以对DNA进行各种实验。通过这样做,他们可以确定分离基因在链上的作用和相互作用。此外,他们可以比较同一物种的健康和不健康个体的基因组文库,看看基因编码的差异会导致哪些意外突变。
在现实中,人类的基因组文库是一个细菌集合,最常见的是大肠杆菌。来自人类基因组的可利用DNA序列被转移并通过大肠杆菌进行携带。DNA通过使用限制性酶消化来制备。然后,使用λ噬菌体将目标片段插入细菌中。这将创建一个基本的未扩增文库,其中细菌被允许繁殖并创建每个DNA片段的额外副本。