结构生物化学/蛋白质/纯化结果分析
外观
在每个纯化步骤之后,溶液中存在的蛋白质类型预计会减少,而其比活性预计会增加。 这两个特性是可取的,因为使用纯蛋白质样品进行的实验可以得到更可量化的结果。 用于检查样品纯度的一种方法是使用某种形式的凝胶电泳,例如 SDS-PAGE 或天然 PAGE。
纯化也可以通过测量总蛋白、总活性、比活性、产量和纯化水平来进行定量评估。 总蛋白是馏分中存在的蛋白质数量,可以通过测量每个馏分一部分的蛋白质浓度并乘以馏分的总体积来确定。 总活性是通过将测定中使用的馏分体积中的酶活性乘以馏分的总体积来测量的。 比活性是总活性除以总蛋白。 产率是每个纯化步骤后保留的活性量。 纯化水平是纯度的增加,可以通过将每个纯化步骤的比活性除以初始提取物的比活性来衡量。
一个好的纯化过程需要考虑产量和纯化水平。 高纯化水平和低产量会带来少量可供使用的蛋白质。 另一方面,低纯化水平和高产量会导致实验中存在污染的蛋白质。