蛋白质组学/蛋白质分离 - 色谱法/固定化金属离子亲和层析 (IMAC)
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章节作者：Laura Grell 和 Alexander Butarbutar
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章节修改者：Kai Burnett 和 Dalia Ghoneim
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固定化金属离子/金属螯合亲和层析是一种分离技术，其基于蛋白质和金属离子之间的配位共价键合。蛋白质具有多种氨基酸组成，这实际上产生了对金属离子的不同亲和力范围。但是，很少有天然存在的蛋白质对金属离子具有亲和力，因此该技术主要用于纯化重组蛋白。例如，蛋白质可以被设计成包含一个多组氨酸尾部（组氨酸通常可以作为二价金属阳离子的配体）。如果固定相固定了二价金属阳离子，则可以根据蛋白质与金属离子的相互作用能力分离蛋白质混合物。那些含有较多组氨酸残基的蛋白质比那些含有较少组氨酸残基的蛋白质能更紧密地结合到柱子上。
已经开发了几种不同类型的固定化金属离子柱来分离各种蛋白质（例如 Fe、Co、Cd、Ni 或 Zn）。IMAC 中的蛋白质分离通常取决于金属离子-蛋白质键的强度。因此，选择固定化离子的类型对于成功的蛋白质分离至关重要。迄今为止，最广泛使用的方法是使用固定化镍柱，并在感兴趣的重组蛋白上设计六个或更多个残基的多组氨酸标签。要记住的一点是，金属离子与蛋白质之间的结合必须是可逆的，以便在后续步骤中洗脱结合的蛋白质。三种不同的洗脱策略可应用于 IMAC 竞争性洗脱、剥离洗脱和 pH 调节 (Ref1).
- Affiland 固定化金属离子亲和层析 (IMAC)
- GE Healthcare 固定化金属离子亲和层析产品
- 默克 使用触角凝胶的金属螯合亲和层析
- 伯乐 Profinity IMAC 树脂
- Paunovic. I, Schulin. R, Nowack, B. 固定化金属离子亲和层析在天然 Cu 配体分级中的应用，Journal of Chromatography A，1100 (2005) 176–184. *
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