GENtle/编辑引物对话框
外观
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此对话框有助于优化引物。为此,将生成许多引物变体,并可以进行检查。
对话框的中心线显示引物的当前变体;该变体的详细信息显示在右上角的框中。确定将结束对话框,将该变体提交到 PCR 模块。取消将结束对话框,并且不更改 PCR 模块。重置将使对话框中的引物恢复到最初启动对话框时的变体。
对话框下半部分的列表包含一个自动生成的当前引物变体列表,按任意分数排序。变体的“区域”可以受对话框左上角区域中多个设置的影响。可用设置包括
- 引物 5' 端向左和向右的变异。
- 引物 3' 端向左和向右的变异。
- 引物的最小和最大长度。
- 引物的最小和最大熔解温度。
更改这些设置中的任何一个都会触发重新计算可能的变异。然后评估这些变异并在对话框下半部分的列表中显示。双击其中一个变异将更改中心线上的当前变异,并在对话框右上角显示属性。
这将显示
- 引物序列,方向为 5'→3'
- ΔH 和 ΔS 值
- 引物的长度和 GC 含量
- 熔解温度,根据最近邻方法计算(通常最佳结果,但仅适用于较长的引物)
- 熔解温度,根据盐调整方法计算(结果中等)
- 熔解温度,根据 GC 方法计算(简单化)
- 最高自退火评分(任意)以及该退火的显示
- 注意:计算引物熔解温度很棘手。如果三种方法中的一种给出的结果与其他两种结果完全不同,请忽略它。此外,熔解温度仅针对与序列退火的引物 3' 端计算!