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GENtle/PCR 和引物设计

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GENtle 手册

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PCR 和引物设计。

此模块允许设计引物和运行虚拟 PCR。 它可以从 DNA 模块通过 DNA 或 [../Sequence map#Context menu|sequence]] 图的上下文菜单启动,或者通过 工具/PCR 启动。 如果在 DNA 模块中选择了序列,则在 PCR 模块启动时会自动生成一个或多个引物。 这些仅仅是粗略的建议,默认情况下不会进行任何优化。

工具栏

[编辑 | 编辑源代码]
  • 输入新的引物
  • 打开引物/序列
  • 打印 PCR
  • 添加引物(您需要先打开或输入引物)
  • 导出引物(生成其序列)
  • 编辑模式
  • 显示/隐藏特征
  • 聚合酶运行长度
  • 水平模式

聚合酶运行长度是指聚合酶在 PCR 延伸步骤中允许运行的核苷酸数量。 这通常以分钟为单位测量,但每种聚合酶的运行速度都不同,这就是这里提供核苷酸信息的原因。 该值最初是自动计算的,但可以手动更改。

引物列表

[编辑 | 编辑源代码]

引物列表(左上角)显示了此 PCR 中使用的所有引物,以及这些引物的某些关键属性。 选择其中一个引物将在右侧的框中显示更详细的信息(有关详细信息,请参见 此处)。 双击其中一个引物将在序列中标记并显示该引物。 可以通过 删除 按钮或 编辑 通过 编辑 按钮删除选定的引物。 也可以通过工具栏中的导出按钮导出选定的引物; 将为该引物生成新的序列。

注意:生成的序列不会自动存储在任何地方,需要手动保存!
注意:要添加引物,请使用工具栏中的添加按钮,或使用 选择作为新引物 上下文菜单。 仅仅编辑序列(见下文)仅用于编辑现有引物,不会创建新的引物!

该序列由以下几行组成

  • 模板 DNA 的特征(可以在工具栏中关闭)
  • 5' 引物
  • 模板 DNA(5'→3')
  • 模板的氨基酸序列
  • 模板 DNA(3'→5')
  • 3' 引物
  • 所得 DNA 的限制性位点
  • 所得 DNA(以绿色显示)
  • 所得 DNA 的氨基酸序列

PCR 序列显示的一些特殊功能和属性

  • 可以按照 此处 所述设置氨基酸读码框。 这将影响显示的两个氨基酸序列(模板和结果)。
  • 只有两个引物序列可以编辑; 必须使用覆盖模式,并且禁用删除。
  • 要删除核苷酸,请使用以下方式覆盖它空格.
  • .” 键会将匹配的模板核苷酸复制到引物序列中的该位置。
  • 匹配的引物核苷酸(即与模板匹配的)以蓝色显示,错配以红色显示。
  • 如果(在编辑模式下)选择了引物序列的空跨度,则可以通过上下文菜单(选择作为新引物)将其变成新的引物。
  • 可以通过上下文菜单在选择(在编辑模式下,光标的右侧或左侧)的左侧或右侧插入限制性位点的序列。 将出现用于所需酶的选择对话框。
  • 可以通过上下文菜单引入 沉默突变

最后,可以通过上下文菜单将所得 DNA 或氨基酸序列(绿色序列,将是 PCR 生成的序列)复制到剪贴板或生成新的序列(包含所有特征、限制性酶等)。

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